母裂解酶-100T来自藤黄节杆菌 现货促销）

母裂解酶-100T来自藤黄节杆菌（现货促销）
Zymolyase-100T From Arthrobacter luteus
-----MP Biomedicals New Zealand Limited
简述： 
 
   Zymolyase-20T（酵母裂解酶-20T）是通过Arthrobacter luteus(藤黄节杆菌)深层培养获得的酶制剂，它能有效的裂解活酵母细胞细胞壁。该制剂是利用亲和层析法部分纯化获得的冻干酶，其酶活单位是100,000 单位/g.其中主要负责裂解活酵母细胞的酶成分是?-1,3-葡聚糖昆布五糖水解酶，通过对?-1,3-葡聚糖连接位水解葡萄糖聚合物，释放产物主要是昆布五糖。
产品说明：
单位定义：800nm条件下菌液吸光度下降30%，表示一个活力单位。
特异性：此产品的裂解谱包括以下属的生物：Ashbya, Candida, Debaryomyces, Eremothecium, Endomyces, Hansenula, Hanseniaspora, Kloekera, Kluyveromyces, Lipomyces, Metschikowia, Pichia, Pullularia, Torulopsis, Saccharomyces, Saccharomcopsis, Saccharomycodes, Schwannimomyces and others.
用途:可用于细胞裂解、原生质球形成及葡聚糖水解。
说明:酵母细胞的裂解程度随酵母菌的种类、生长阶段及培养条件而改变。
声明: Zymolyase是麒麟麦酒股份有限公司（Kirin Brewery Co., Ltd）的注册商标。
储存:冻干状态于2-8°C中保存，若30°C下放置3个月约失去90%活力。
外观:冻干粉
活力：100,000单位/g
核心酶：?-1,3-葡聚糖昆布五糖水解酶
其他酶: ?-1,3-葡聚糖酶，约1.0 x 107 单位 /g
         蛋白酶，约1.7 x 104单位 /g
甘露聚糖酶, 约6.0 x 104单位 /g
 淀粉酶，木聚糖酶，***酶，微量DNase及Rnase（未检出）
催化剂：二硫苏糖醇（DTT）, ?-巯基乙醇及其他的巯基化合物（如半胱氨酸）
较适pH及温度：
     pH 7.5, 35°C裂解活酵母细胞
     pH 6.5, 45°C水解酵母葡聚糖
pH范围：pH 5-10间保持稳定
热稳定性：60°C，5min丧失细胞溶解能力
警告：（1）Zymolase?-100T溶解度低，以悬浮液的状态使用。如果需制备浓度**过0.05%的无菌酶溶液，则通过将Zymolase?-100T溶解在含5%葡萄糖的缓冲液中（pH 7.5），首先配制2%的酶储存液；（2）吸取悬浮液，留下沉至容器管底的任何物质；（3）不推荐使用**纤维过滤器；（4）稀释无菌的酶悬浮液至目标浓度。
原生质球制备程序：
 
1.      室温条件，5000rpm（3000 xg），5min离心酵母培养物；
2.      收集离心沉淀物（酵母细胞）并记录湿重；
3.      用TE缓冲液悬浮细胞，加入量为1.4ml/g湿重细胞；（TE缓冲液配方：100 mM Tris [MP 8196231]，pH 8.0，100 mM EDTA [MP195173]）
4.      双蒸水快速定容，终体积量为3.5ml/g湿重细胞；
5.      按照17.5 ul (总体积的1/200)/ g湿重细胞的量加入? -巯基乙醇（MP 806445），目的是为了除去细胞外层中的甘露聚糖层；
6.      30°C轻摇温育混合液，处于对数期生长的培养物处理15min，处于稳定期生长的培养物处理45min；
7.      室温条件，5000rpm离心5min；
8.      用S缓冲液重新悬浮细胞，加入量为4.0ml/g湿重细胞；（S缓冲液配方：1.0 M 山梨糖[MP 102938]，10 mM PIPES (MP 190257), pH 6.5）
9.      5000rpm离心5min；
10.   再次用S缓冲液（4.0ml/g湿重细胞）悬浮细胞，另外加入Zymolyases（50U /g湿重细胞）；如果Zymolyases配制成附录所示的溶液，则添加250ul即可。较好根据实验情况较先优化酶使用量。
11.   30°C轻摇温育混合液30min，根据以下方式监测原生质球形成程度：
（1）         加1ul样品到20ul S 缓冲液内，原生质球应该保持完整；
（2）         加1ul样品到20ul双蒸水中，原生质球应该破裂；显微镜下观察比较两个样品的形态差异。
12．一般情况下反应45-60min，原生质球的形成量>90%，此时4oC下离心收集细胞，5000rpm，5min；
13. 再次用S缓冲液（2 ml/g湿重细胞）悬浮原生质球，5000rpm离心5min；重复此步骤做*二次清洗；；
14.原生质球离心沉淀物-70oC冻存。
裂解原生质球获取细胞核： 
   温和的裂解原生质球方法如下; 用3倍体积的18%Ficoll（MP 160003）溶液悬浮细胞离心沉淀物，Ficoll溶解于含有0.5 mM CaCl2 (MP 195088)的10 mM PIPES 缓冲液内，pH 6.5。
酵母菌基因组DNA的制备： 
 以下步骤快捷，适合于从少量酵母培养物中制备基因组DNA ：
1.     将过夜培养的10ml酵母菌培养物离心收集细胞，加入280ul TE Buffer（配方见原生质球制备程序中的步骤3），300 ul双蒸水，3 ul ? -巯基乙醇（MP 806445）；
2.     30oC温育45min；
3.     以台式离心机的较高速度离心2-3s，弃上清液，沉淀物用500 ul S 缓冲液（配方见原生质球制备程序中的步骤8）悬浮.；再次离心弃上清；
4.     用500 ul含有1 mg/ml Zymolyase 20T（MP 32-092-1）的S缓冲液悬浮细胞沉淀物（或者使用自己认为较合适的酶浓度）；
5.     30oC温育1小时；
 
6.     重复步骤3；
7.     用200 ul含有0.1%SDS（MP 190522）和2ug蛋白酶K (MP 809252)的TE 缓冲液悬浮细胞沉淀物；
8.     37oC温育3小时，不时的混匀溶液；
9.     调水浴锅的温度至65oC，并温育20min；
10.  从水浴锅内取出并冷却至室温；
11.  用200ul 1:1的Tris饱和酚-氯仿混合液萃取，漩涡混匀并离心；从离心机内取出并保留上清液；
12.  用200ul氯仿萃取上清液，之后重复漩涡混匀及离心；
13.  加入500ul95%乙醇到上清液内，20oC沉淀10min；
14.  4oC下，15,000 xg离心20 min；
15.  自然风干或者于真空离心蒸发浓缩器内晾干除去多余的乙醇，并加入200ul TE缓冲液（含有150 mM NaCl和1 ug核糖核酸酶A (MP 101076)）溶解DNA;
16.  37oC温育1小时；
17.  重复步骤11和12；
18.  加入2.5倍体积的95%乙醇，20oC沉淀10min；
19.  30ul双蒸水重悬DNA。对1:500的DNA稀释液测量A260，根据消光系数计算DNA产量；
20.  产量大约为40-50ug。
附录:
制备Zymolyase 100T溶液：
以下配制的溶液适用于该产品的实验程序中（但并不排除其他类型的母液也适用）
配制200单位/ml的母液，将冻干粉溶于已高压灭菌的S缓冲液（配方见原生质球制备程序中的步骤8）。
如果不被微生物污染，于4 oC下，此母液能2个星期以上时间内保持高效；
参考文献：
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08320921	320921	Zymolyase 20T	1 g	3841.00
08320931	320931	ZYMOLYASE 100T	500 mg	16128.00
08320932	320932	ZYMOLYASE 100T	250 mg	9898.00

厂家说明：
MP Biomedicals生物医学公司是位于美国加利福尼亚州的**生命科学和生物技术厂商。2004年底成功收购Qbiogene、ICN，现在**有5个大型仓库，能够及时供应各行业需求，亚洲仓库位于新加坡。它致力于生命科学领域的基础研究和探索。目前它提供55000多种产品，是世界上能*提供生命科学产品和临床诊断产品的几家厂商之一。
北京毕特博生物技术有限责任公司是此美国MPBIO的代理商，同时经营此品牌已有年的历史了。